Staphylococcus aureus Aranması ve Sayımı

23525 kez okundu

14 yıl önce eklendi

Ana Sayfa » Makale-Yöntem » Mikrobiyolojik Analiz» Staphylococcus aureus Aranması ve Sayımı

Sporsuz ve hareketsiz kok formundaki bu bakteri Gram pozitif ve katalaz pozitif özelliktedir. Fakültatif anaerob gelişim gösterir ve mezofil karakterlidir. S. aureus suşları optimum 30-37°C'lerde gelişirler. Gelişme sınırları 6-46°C arasındadır. Toksin oluşturmaları icin gerekli minimum ve maksimum sıcaklık dereceleri biraz daha yüksek olup 10-48°C dir. Optimum olarak 7.0-7.5 pH' yı yeğleyen S. aureus 4.0-9.3 pH sınırları arasında da gelişmesini sürdürür. Gıdalarda toksin
oluşturabilmek için minimum pH istekleri, vejetatif gelişme isteklerinin biraz üzerindedir (pH 4.9-5.1). Benzer durum su aktivitesi (As) değerlerinde de görülür. Minimum su aktivitesi değeri; aerob gelisme için As= 0.83-0.86, anaerob gelisme için As= 0.90 olarak belirlenmiştir. Toksin oluşturabilmek için ise daha yüksek su aktivitesi değerleri talep ederler. S aureus 'un sıcaklığa direnci bulunduğu gıda maddesinin yapısına göre farklılık gösterir.

S. aureus gram pozitif, yuvarlak, sporsuz, hareketsiz, katalaz pozitif, koagulaz pozitif bir bakteridir. Menenjit, septisemi ve yara iltihaplarına yol açması yanında, gıda zehirlenmelerine de sebep olur. En riskli gıdalar peynir, süt, krema, dondurma, et ve et ürünleridir.
S. aureus analizinde en çok kullanılan besiyeri Baird Parker Agar’dır. Agar’ın çalışma prensibi, S. aureus’un potasyum telluriti indirgemesi ve yumurta sarısını hidrolize etmesi özelliğine dayanır. Uygun koşullarda alınarak laboratuara getirilen gıda numunesi tartılır, dilusyon sıvısı eklenir ve homojenize edilir. Daha sonra Baird Parker Agar’a uygun dilusyon ve miktarda ekim yapılır.Ekim yapılan petriler 35 ± 1 °C sıcakliktaki etüvde 48 saat inkubasyona bırakılır. İnkubasyon sonunda petri ortamında görülen yuvarlak, pürüzsüz, konveks, dar ve çevresinde yarı saydam bir zon bulunan, 2-3 mm çapında siyah-gri parlak koloniler şüpheli S. aureus kolonileridir.
Tipik kolonilere koagulaz testi uygulanır. Bu iş için hazır ticari kitler bulunmakla birlikte, liyofilize tavşan plazması da kullanılabilir. Hazır ticari kitlerde tipik koloni direkt teste uygulanarak sonuç alınabilir. Tavşan plazması ile uygulanan doğrulama testlerinde ise şüpheli koloniler küçük Brain Heart İnfusion Broth tüplerine alınıp 35°C de 18-24 saat zenginleştirdikten sonra üzerine sulandırılmış tavşan plazması eklenir ve 35°C de inkübasyona bırakılır 6 saat sonra tüpler eğilip pıhtılaşmalar kontrol edilir.
Tüm bu testlere ek olarak yapılması gereken diğer testler:
Katalaz Testi +
Termonüklaz üretimi +
Glikozun anaerobik kullanımı +
Mannitolün anaerobik kullanımı +

oluşturabilmek için minimum pH istekleri, vejetatif gelişme isteklerinin biraz üzerindedir (pH 4.9-5.1). Benzer durum su aktivitesi (As) değerlerinde de görülür. Minimum su aktivitesi değeri; aerob gelisme için As= 0.83-0.86, anaerob gelisme için As= 0.90 olarak belirlenmiştir. Toksin oluşturabilmek için ise daha yüksek su aktivitesi değerleri talep ederler. S aureus 'un sıcaklığa direnci bulunduğu gıda maddesinin yapısına göre farklılık gösterir.

S. aureus gram pozitif, yuvarlak, sporsuz, hareketsiz, katalaz pozitif, koagulaz pozitif bir bakteridir. Menenjit, septisemi ve yara iltihaplarına yol açması yanında, gıda zehirlenmelerine de sebep olur. En riskli gıdalar peynir, süt, krema, dondurma, et ve et ürünleridir.
S. aureus analizinde en çok kullanılan besiyeri Baird Parker Agar’dır. Agar’ın çalışma prensibi, S. aureus’un potasyum telluriti indirgemesi ve yumurta sarısını hidrolize etmesi özelliğine dayanır. Uygun koşullarda alınarak laboratuara getirilen gıda numunesi tartılır, dilusyon sıvısı eklenir ve homojenize edilir. Daha sonra Baird Parker Agar’a uygun dilusyon ve miktarda ekim yapılır.Ekim yapılan petriler 35 ± 1 °C sıcakliktaki etüvde 48 saat inkubasyona bırakılır. İnkubasyon sonunda petri ortamında görülen yuvarlak, pürüzsüz, konveks, dar ve çevresinde yarı saydam bir zon bulunan, 2-3 mm çapında siyah-gri parlak koloniler şüpheli S. aureus kolonileridir.
Tipik kolonilere koagulaz testi uygulanır. Bu iş için hazır ticari kitler bulunmakla birlikte, liyofilize tavşan plazması da kullanılabilir. Hazır ticari kitlerde tipik koloni direkt teste uygulanarak sonuç alınabilir. Tavşan plazması ile uygulanan doğrulama testlerinde ise şüpheli koloniler küçük Brain Heart İnfusion Broth tüplerine alınıp 35°C de 18-24 saat zenginleştirdikten sonra üzerine sulandırılmış tavşan plazması eklenir ve 35°C de inkübasyona bırakılır 6 saat sonra tüpler eğilip pıhtılaşmalar kontrol edilir.
Tüm bu testlere ek olarak yapılması gereken diğer testler:
Katalaz Testi +
Termonüklaz üretimi +
Glikozun anaerobik kullanımı +
Mannitolün anaerobik kullanımı +

Yapılan tüm ekim ve doğrulama testleri sonucu pozitif veren koloniler dilüsyon katsayısı ile çarpılarak St aureus sayısı kob/g (ml) olarak sonuç belirtilir.
 
Diatek tarafından satın alabileceğiniz Hazır besiyerleri ve Toz besiyerleri analizlerinizde başarılı sonuçlar verir.